кровь на совместимость

Ответ от Елена Филатова[гуру]
Техника проведения пробы на индивидуальную совместимость.
Во всех случаях, кроме срочных трансфузий, проба проводится в два этапа: первый - без использования антиглобулинового реагента, второй - с антиглобулиновым реагентом или с использованием желатина. В случае использования желатина метод менее чувствителен. В случаях срочных трансфузий двухэтапное определение рекомендуется проводить с раствором низкой ионной силы (LISS).Первый этап
1. Поместите 2 капли сыворотки реципиента в маркированную пробирку.
2. Добавьте 1 каплю 5% суспензии трижды отмытых эритроцитов донора в физиологическом растворе или в растворе низкой ионной силы LISS (фиксация антител происходит лучше в среде с низкой ионной силой, поэтому предпочтительнее взвесить эритроциты в растворе LISS, обычно поставляемом изготовителем вместе с антиглобулиновым реагентом) .
3. Немедленно центрифугируйте при 2000 об/мин в течение 15-20 секунд.
4. Просмотрите супернатант на наличие гемолиза. Мягко покачивая пробирку, отделите клеточный осадок от дна пробирки и определите наличие агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов на этой стадии могут означать: а) несовместимость по системе АВО; б) присутствие в сыворотке реципиента полных антител не АВО специфичности, активных при комнатной температуре (анти-S, анти-Р1, анти-M и др) .
Второй этап с антиглобулиновым реагентом
5. Если гемолиз отсутствовал, а после встряхивания пробирки эритроциты образовали гомогенную суспензию, инкубируйте пробирку 30-45 минут (при использовании LISS время инкубации составляет 10-15 минут) при 37оС.
6. Центрифугируйте пробирку, как в пункте 3, и просмотрите супернатант на наличие гемолиза и агглютинатов. Наличие гемолиза и/или агглютинатов (после встряхивания пробирки) говорит о присутствии у реципиента полных тепловых антител против эритроцитов донора.
7. Если гемолиз и агглютинация отсутствуют, отмойте эритроциты 3-4 раза большим объемом (не менее 5 мл) физраствора (недостаточное отмывание может привести к инактивации антиглобулинового реагента остатком сыворотки и ложноотрицательному результату) ; удалите полностью физраствор после последнего отмывания.
8. Добавьте 1-2 капли антиглобулиновой сыворотки и тщательно смешайте.
9. Центрифугируйте пробирку, как в пункте 3, мягко разбейте осадок и просмотрите пробирку на наличие агглютинатов.
Качество антиглобулинового реагента гарантируется изготовителем. Не используйте реагент с истекшим сроком годности или после повторного замораживания-оттаивания. Полезно в качестве контроля (если у вас возникли сомнения в качестве реагента) провести антиглобулиновый тест со стандартными резус-положительными и резус-отрицательными эритроцитами (см. Методические указания по определению резус-принадлежности крови) .
Второй этап при использовании желатина
5. Если гемолиз отсутствовал, а после встряхивания пробирки эритроциты образовали гомогенную суспензию, добавьте 2 капли 10% раствора желатина, подогретого до разжижения, и тщательно смешайте.
6. Инкубируйте пробирку при 46-48о 10 мин на водяной бане или 30 мин в суховоздушном термостате.
7. Добавьте 5-8 мл физиологического раствора и 1-2 раза осторожно переверните закрытую пробирку для перемешивания.
8. Определите наличие агглютинации, просматривая пробирку на свет невооруженным глазом или через лупу.
При необходимости срочной трансфузии можно ограничиться только стадиями 1-4 пробы на совместимость. В этом случае допускается также проведение теста на индивидуальную совместимость на плоскости, путем смешивания 1 капли сыворотки реципиента с каплей эритроцитов донора (соотношение сыворотки и крови должна быть около 5:1). В такой постановке проба на индивидуальную совместимость сводится фактически к выявлению совместимости только по системе АВО.
Донор считается совместимым, если ни на одной стадии пробы на индивидуальную соместимость не наблюдается ни гемолиза, ни агглютинации. Наличие их свидетельствует о присутствии в сыворотке реципиента антител к эритроцитам пред
Источник: МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГРУПП КРОВИ АВО Утверждены Директором Гематологического Научного Центра РАМН Академиком А. И. Воробьевым 27.04.1999